Hoe beïnvloedt verdunning chromatografie en massaspectrometrie, en moet je dit corrigeren?

Als je een stof verdunt voordat je deze analyseert met chromatografie of massaspectrometrie, heeft dit invloed op de intensiteit van de signalen, maar niet op de identiteit van de stof.

Chromatografie

Bij chromatografie, zoals papierchromatografie, zal het verdunnen van een stof ervoor zorgen dat de vlekken op het chromatogram minder intens of zelfs nauwelijks zichtbaar zijn. Dit komt doordat er minder van de stof aanwezig is. De scheiding zelf en de $R_f$-waarden van de stoffen veranderen echter niet, zolang de loopvloeistof en de stationaire fase hetzelfde blijven.

• Kwalitatieve analyse (identificatie): Als de vlekken nog zichtbaar zijn en je de $R_f$-waarden kunt bepalen, hoef je niets aan de stof zelf te "corrigeren" voor identificatie.
• Kwantitatieve analyse (hoeveelheid bepalen): Als je de oorspronkelijke concentratie van de onverdunde stof wilt weten, moet je de verdunningsfactor meenemen in je berekening. Je vermenigvuldigt dan de gemeten concentratie met de verdunningsfactor om de oorspronkelijke concentratie te krijgen.

Massaspectrometrie

Bij massaspectrometrie zal het verdunnen van een stof leiden tot lagere piekhoogtes in het massaspectrum. Er komen immers minder moleculen in de ionisatiekamer, waardoor er minder ionen worden gevormd en gedetecteerd. De massa-ladingverhoudingen ($m/z$) van de pieken (molecuul-ion en fragmenten) blijven hetzelfde, evenals de relatieve verhoudingen tussen de pieken (het fragmentatiepatroon), tenzij de verdunning extreem is.

• Kwalitatieve analyse (identificatie): Als de pieken nog duidelijk zichtbaar zijn en je de $m/z$-waarden kunt aflezen, hoef je niets aan de stof zelf te "corrigeren" voor identificatie.
• Kwantitatieve analyse (hoeveelheid bepalen): Net als bij chromatografie moet je voor kwantitatieve analyse de verdunningsfactor meenemen in je berekening. De intensiteit van de pieken is direct gerelateerd aan de concentratie. Je vermenigvuldigt de gemeten concentratie (afgeleid van de piekhoogtes) met de verdunningsfactor om de oorspronkelijke concentratie te bepalen.

Correctie

Voor kwantitatieve analyses is het dus essentieel om de verdunningsfactor te gebruiken om de oorspronkelijke concentratie van de stof te berekenen. Als een stof bijvoorbeeld 10 keer is verdund, vermenigvuldig je de gemeten concentratie met 10 om de concentratie van de onverdunde stof te vinden.